ໂມເລກຸນວິທີການຄົ້ນຄ້ວາທາງຊີວະພາບແລະການນໍາໃຊ້ຂອງເຂົາເຈົ້າ

ໂມເລກຸນຊີວະ ວິທີການຄົ້ນຄ້ວາ ມີບົດບາດສໍາຄັນໃນຢາປົວພະຍາດທີ່ທັນສະໄຫມ, ວິທະຍາສາດທາງນິຕິເວດແລະຊີວະສາດ. ຂໍຂອບໃຈກັບຄວາມກ້າວຫນ້າໃນການສຶກສາຂອງ DNA ແລະ RNA ໄດ້, ບຸກຄົນທີ່ສາມາດສໍາຫລວດການທັງຂອງອົງການຈັດຕັ້ງກໍານົດຕົວແທນສາເຫດ, ທີ່ຈະຮັບຮູ້ກົດນິວຄີອິກທີ່ຕ້ອງການໃນການປະສົມຂອງອາຊິດ, ແລະອື່ນໆ

ວິທີການແຜ່ດ້ານຊີວະສາດ. ມັນແມ່ນຫຍັງ?

ກັບຄືນໄປບ່ອນໃນ 70-80 ຂອງວິທະຍາສາດດັ່ງກ່າວນີ້ແມ່ນຄົນທໍາອິດທີ່ຖອດລະຫັດ ທັງມະນຸດ. ກໍລະນີນີ້ໃຫ້ແຮງຜັກດັນໃຫ້ການພັດທະນາຂອງວິສະວະກໍາພັນທຸກໍາແລະຊີວະສາດໂມເລກຸນ. ສຶກສາຄຸນສົມບັດຂອງ DNA ແລະ RNA ໄດ້ຫມາຍຄວາມວ່າມັນເປັນໄປໄດ້ທີ່ຈະນໍາໃຊ້ກົດນິວຄີອິກເຫຼົ່ານີ້ສໍາລັບຈຸດປະສົງຂອງການບົ່ງມະຕິພະຍາດ, gene ການສຶກສາ.

ການກະກຽມຂອງ DNA ແລະ RNA

ໂມເລກຸນຊີວະ ວິທີການວິນິດໄສ ໃຊວິທີເລີ່ມວັດສະດຸ: ມັກນີ້ ກົດນິວຄີອິກ. ມີຫຼາຍວິທີການທີ່ຈະເລືອກເອົາສານເຫຼົ່ານີ້ມາຈາກຈຸລັງຂອງສິ່ງມີຊີວິດແມ່ນ. ແຕ່ລະມີຄວາມໄດ້ປຽບແລະຂໍ້ເສຍຂອງຕົນ, ແລະມັນຄວນຈະໄດ້ຮັບການພິຈາລະນາໃນເວລາທີ່ເລືອກວິທີການຂອງການແຍກກົດນິວຄີອິກໃນຮູບແບບບໍລິສຸດ.

1. ການກະກຽມຂອງ DNA ໂດຍ Marmur. ວິທີການທີ່ປະກອບດ້ວຍໃນການປິ່ນປົວປະສົມຂອງສານເຫຼົ້າ, precipitates ຜົນ DNA ອັນບໍລິສຸດ. ຂໍ້ເສຍຂອງວິທີການນີ້ແມ່ນການນໍາໃຊ້ສານ corrosive, phenol ແລະຢາໄດ້.

2. ຫ່າງໄກສອກຫລີກຂອງ DNA ໃນຂະຫຍາຍຕົວຢ່າງ. ສານເສບຕິດຕົ້ນຕໍທີ່ນໍາໃຊ້ຢູ່ທີ່ນີ້ - ເປັນ guanidine Thiocyanate (GuSCN). ມັນສົ່ງເສີມການສະສົມຂອງການ ອາຊິດ deoxyribonucleic ສຸດ substrates ຜູ້ຊ່ຽວຊານ, ຈາກທີ່ມັນສາມາດເກັບກໍາຂໍ້ມູນຕໍ່ມາໂດຍວິທີການຂອງບັຟເຟີພິເສດ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ GuSCN - ເປັນ inhibitor ຂອງ TCP, ແລະແມ້ແຕ່ສ່ວນຂະຫນາດນ້ອຍຂອງທີ່ໄດ້ຮັບການຝາກເຂົ້າໃນ DNA ສາມາດມີອິດທິພົນຫຼັກສູດຂອງຕິກິຣິຍາລະບົບຕ່ອງໂສ້ໂພລິເມີຊຶ່ງເປັນສິ່ງສໍາຄັນໃນເວລາທີ່ເຮັດວຽກຮ່ວມກັບອາຊິດນິວເຄລຍ.

3 Precipitation ຂອງ impurities. ວິທີການແຕກຕ່າງຈາກບໍ່ທີ່ຜ່ານມາໃນທີ່ molecules ຂອງເຂົາເຈົ້າເອງຍັງບໍ່ໄດ້ຝາກກົດ dehoksiribonukleinovoy ແລະ impurities. ເພື່ອເຮັດສິ່ງນີ້, ການນໍາໃຊ້ການແລກປ່ຽນ ion ໄດ້. ຄົນດ້ອຍໂອກາດແມ່ນວ່າບໍ່ແມ່ນສານທັງຫມົດສາມາດແກ້ໄຂ.

4. ມະຫາຊົນກວດ. ວິທີການນີ້ແມ່ນໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນກໍລະນີໃນເວລາທີ່ທ່ານບໍ່ຈໍາເປັນຕ້ອງມີຂໍ້ມູນທີ່ຖືກຕ້ອງກ່ຽວກັບໂຄງປະກອບການຂອງໂມເລກຸນ DNA ໄດ້, ແລະຄວາມຕ້ອງການເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຮັບສະຖິຕິຈໍານວນຫນຶ່ງ. ເຫດຜົນແມ່ນວ່າໂຄງປະກອບຂອງນິວຄລີອິກອາຊິດສາມາດໄດ້ຮັບການເສຍຫາຍໃນເວລາທີ່ການຈັດການອຸປະສັກ, ໂດຍສະເພາະ alkalies.

ການຈັດປະເພດຂອງວິທີການຄົ້ນຄ້ວາ

ທັງຫມົດວິທີການແຜ່ດ້ານຊີວະສາດຂອງການຄົ້ນຄວ້າຖືກແບ່ງອອກເປັນສາມກຸ່ມໃຫຍ່:

1. Amplification (ການນໍາໃຊ້ຄໍາຂອງ enzymes ກ). ນີ້ປະກອບມີ PCR - ຕິກິຣິຍາລະບົບຕ່ອງໂສ້ໂພລິເມີຊຶ່ງມີບົດບາດສໍາຄັນໃນຈໍານວນຫຼາຍຂອງວິທີການບົ່ງມະຕິ.

2 Neamplifikatsionnye. ກຸ່ມຂອງວິທີການນີ້ແມ່ນໄດ້ຖືກທີ່ກ່ຽວຂ້ອງໂດຍກົງກັບວຽກງານການປະສົມອາຊິດນິວເຄລຍ. ຕົວຢ່າງແມ່ນ 3 ປະເພດ blots, ໃນການຜະສົມພັນຖີ່ນກໍາເນີດ, ແລະອື່ນໆ

3. ວິທີການອີງໃສ່ການຮັບຮູ້ຂອງສັນຍານຈາກໂມເລກຸນ probe, ເຊິ່ງ binds ກັບ DNA ຫຼື RNA ເພາະ probe ໄດ້. ຕົວຢ່າງ - ລະບົບການຜະສົມພັນ Hybride ແກ້ໄຂລະບົບ Capture (HC2).

Enzymes ທີ່ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໃນວິທີການຄົ້ນຄ້ວາດ້ານຊີວະສາດໂມເລກຸນ

ເຕັກນິກການບົ່ງມະຕິການແຜ່ກະຫຼາຍມີການນໍາໃຊ້ຂອງລະດັບຄວາມກວ້າງຂອງ enzymes. ຂ້າງລຸ່ມນີ້ແມ່ນໃຊ້ຫຼາຍທີ່ສຸດມັກຈະ:

1. enzyme ຂໍ້ຈໍາກັດ - "ຕັດ" ໄດ້ molecule DNA ກັບພາກສ່ວນທີ່ຈໍາເປັນ.

2. ໂພລິເມີ DNA - ສັງເຄາະເປັນສອງເທົ່າ, stranded molecule ອາຊິດ deoxyribonucleic.

3 Reverse transcriptase (transcriptase ໄດ້ຢ່າງສິ້ນເຊີງ) - ນໍາໃຊ້ເພື່ອສັງເຄາະ DNA ຈາກແມ່ແບບ RNA.

4. DNA ligase - ຮັບຜິດຊອບສໍາລັບການສ້າງພັນທະບັດ phosphodiester ລະຫວ່າງນິວຄີໄດ້.

5. exonuclease - ເອົາເຕີມຈາກສ່ວນປາຍຂອງອະນູອາຊິດ deoxyribonucleic ໄດ້.

PCR - ວິທີການພື້ນຖານຂອງການຂະຫຍາຍ DNA

ລະບົບຕ່ອງໂສ້ຕິກິຣິຍາ Polymerase (PCR) ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນຊີວະສາດໂມເລກຸນທີ່ທັນສະໄຫມ. ວິທີການດັ່ງກ່າວນີ້, ໃນທີ່ເປັນ molecule DNA ດຽວສາມາດໄດ້ຮັບຈໍານວນທີ່ຍິ່ງໃຫຍ່ຂອງສໍາເນົາ (amplifying ໂມເລກຸນ).

ຫນ້າທີ່ຕົ້ນຕໍຂອງ PCR:

- ການບົ່ງມະຕິຂອງພະຍາດ;

- ຮູບແບບສໍາຮອງສ່ວນ DNA, Gene.

ເພື່ອປະຕິບັດຕິກິຣິຍາລະບົບຕ່ອງໂສ້ໂພລິເມີຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີອົງປະກອບດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: ໂມເລກຸນ DNA ໃນເບື້ອງຕົ້ນ, ເປັນໂພລິເມີ DNA ອຸນຫະພູມິ (Taq ຫຼື Pfu), ຟອສເຟດ deoxyribonucleotide (ແຫຼ່ງຂໍ້ມູນຂອງຖານຂໍ້ໄນໂຕຣເຈນ) ໄພເມີ (2 primer 1 DNA molecule) ແລະຕົວຂອງມັນເອງເປັນລະບົບປ້ອງກັນທີ່ອາດຈະດໍາເນີນການ ຕິກິລິຍາທັງຫມົດ.

PCR ປະກອບດ້ວຍສາມຂັ້ນຕອນ: denaturation, ຫລອມ primer ແລະຍາວ.

1. denaturation. ໃນອຸນຫະພູມຂອງ 94-95 ອົງສາ Celsius proshodit ທໍາລາຍພັນທະບັດ hydrogen ລະຫວ່າງສອງລະບົບຕ່ອງໂສ້ຂອງ DNA, ແລະເປັນຜົນມາຈາກພວກເຮົາໄດ້ຮັບສອງ molecules ດຽວ stranded.

2 ເມີ annealed. ໃນອຸນຫະພູມຂອງ 50-60 ອົງສາເຊນຕິເກດເກີດຂຶ້ນເມີເຂົ້າຢູ່ປາຍຂອງ molecules ກົດ nucleic ດຽວຄ້າງຕາມຊະນິດຂອງ complementarity ໄດ້.

3. ຍາວ. ໃນອຸນຫະພູມຂອງ 72 ອົງສາໄດ້ລູກສາວ synthesized stranded double molecules ອາຊິດ deoxyribonucleic.

ລໍາດັບ DNA

ໂມເລກຸນວິທີການຄົ້ນຄ້ວາທາງຊີວະພາບມັກຈະຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີຄວາມຮູ້ຂອງລໍາດັບຂອງນິວຄີໂອໃນໂມເລກຸນຂອງອາຊິດ deoxyribonucleic ເປັນ. ການກໍານົດທີ່ ລະຫັດພັນທຸກໍາ ລໍາດັບ. ການວິນິດໄສໂມເລກຸນຂອງອະນາຄົດຈະໄດ້ຮັບການໂດຍອີງໃສ່ຄວາມຮູ້ທີ່ໄດ້ຮັບໃນການຕັດສິນໃຈຂອງລໍາດັບຂອງມະນຸດໄດ້.

ປະເພດດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້ຂອງ sequencing:

• ລໍາດັບໂດຍ Maxam-Gilbert;
• Sanger sequencing;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe sequencing.